2-取代-4-內蒙古氨基嘧啶?類化合物的合成及抗腫瘤活性的初步研究~

內蒙古氨基嘧啶癌癥,聞者生畏,嚴重的威脅人民的健康和生活質量。我國是全球新增癌癥病例以及因癌癥死亡人數最多的國家。隨著生物學及其相關技術的不斷發展,對腫瘤的治療已經到了分子水平。靶向治療已經成為腫瘤治療發展的方向,它豐富了腫瘤的治療手段,為患者帶來了治愈的希望。研究表明嘧啶類化合物在腫瘤的靶向治療方面具有良好應用價值,含有4-芳氨基嘧啶的酪氨酸激酶抑制劑奧斯替尼和伊馬替尼等,在治療初期,均能表現出較好的效果。令人遺憾的是用藥9-14個月后,會出現不同程度的耐藥性。因此,設計并合成毒性小、耐藥性低的抗腫瘤藥物迫在眉睫。本文利用計算機輔助藥物設計軟件Sybyl,設計并化學合成了一系列2-取代-4-芳氨基嘧啶類化合物。以期望發現高活性、低毒副作用的新型抗腫瘤化合物。本研究主要內容如下:1.在總結癌癥的治療方法,特別是分子靶向治療的研究進展、具有生物活性的嘧啶及其衍生物的研究進展以及以嘧啶為母核的酪氨酸激酶抑制劑研究進展的基礎上,利用計算機輔助藥物設計軟件Sybyl,以奧斯替尼為參照配體,EGFR（PDB No:4LL0）為受體,與設計的小分子化合物進行分子對接,虛擬篩選出15個2-取代-4-芳氨基嘧啶類化合物作為化學合成的目標化合物。2.為合成虛擬篩選出的目標化合物。首先進行了重要中間體2-氯-4-芳氨基嘧啶類化合物的合成。分別通過3-氯-4-氟苯胺、3-乙炔基苯胺、3-氯-4-（3-氟芐氧基）苯胺、3-氯-4-（吡啶-2-基甲氧基）苯胺和3-氯-4-（3-（三氟甲基）苯氧基）內蒙古氨基嘧啶苯胺5種芳胺與2,4-二氯嘧啶分子中4-位氯之間發生選擇性芳環上的親核取代反應,以乙醇為溶劑、Et3N為縛酸劑,合成得到了 2-氯-4-（3-氯-4-氟苯氨基）嘧啶、2-氯-4-（3-乙炔基苯氨基）嘧啶、2-氯-4-（3-氯-4-（3-氟芐氧基）苯氨基）嘧啶、2-氯-4-（3-氯-4-（吡啶-2-基甲氧基）苯氨基）嘧啶和2-氯-4-（3-氯-4-（3-（三氟甲基）苯氧基）苯氨基）嘧啶5種中間體化合物,收率為65～68%。3.以2-二乙氨基乙胺分別與5種2-氯-4-芳氨基嘧啶中間體間的親核取代反應合成得到了 5種“N”系列目標化合物C1-C5,收率為66～82%。以2-二乙氨基乙醇分別與5種2-氯-4-芳氨基嘧啶中間體之間的親核取代反應合成得到了 5種“O”系列的目標化合物C6-C10,收率為50～58%。最后以N,N-二乙氨基氯乙烷鹽酸鹽的異硫脲鹽為原料經水解后,與5種2-氯-4-芳氨基嘧啶中間體之間的親核取代反應合成得到了 5種“S”系列的目標化合物C11-C15,收率為62～66%。合成的15個目標化合物均經1H NMR、13C NMR、HRMS、IR進行了結構確證。4.以臨床抗腫瘤藥物拉帕替尼、吉非替尼、奧斯替尼為陽性對照,以人結腸癌細胞SW480、人皮膚鱗癌細胞A431、人非小細胞肺癌細胞A549和NCI-H1975作為受試細胞,利用MTT法對所合成的15個2-取代-4-芳氨基嘧啶類化合物進行了體外抑制腫瘤細胞增殖活性的評價,結果表明C3、C5、C6、C13和C15對這四種腫瘤細胞表現出較好的增殖抑制活性,其IC50值為0.36～6.24 μM,明顯優于臨床藥物吉非替尼和拉帕替尼,特別是化合物C3和C13對4個受試腫瘤細胞增殖的抑制活性分別為0.36～3.48 μM和0.40～1.88 μM,與臨床藥物奧斯替尼的活性（0.05～2.67 μM）相當。并對化合物C3進行了誘導細胞凋亡和細胞周期影響的評價,結果顯示化合物C3作用于A549細胞48 h,內蒙古氨基嘧啶能夠誘導細胞凋亡,并將細胞周期停滯在G0/G1期。